CCK8試劑盒日本同仁常見問題解答(二)

 　　上篇文章，我們已經介紹了一部分CCK8試劑盒日本同仁的常見問題，本文將繼續為大家講解。

　　1、實驗之前，是否需要先檢測一下培養基和CCK-8是否會反應?建議使用一個孔作一下檢測，因為有培養基中可能含有氧化還原反應的物質，在正式實驗之前有必要先確認培養基和CCK-8是否反應。一般正常在的OD值應該在0.4以下。

　　2、如果加入的藥物中含有金屬，是否會有影響?金屬對CCK-8顯色有影響。當終濃度為1 Mm的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制5%、15%、90%的顯色反應，使靈敏度降級。如果終濃度是10 Mm的話，將會100%抑制。

　　3、CCK8試劑盒日本同仁試劑的保存條件?在避光條件下CCK-8試劑在4℃可保存一年。如果需要保存較長時間的話，推薦在-20℃下保存。但是CCK-8若反復解凍和冰凍將會增加空白吸收，從而影響檢測結果，若經常使用可將試劑存放在4℃冰箱內保存。

　　4、如何減少由于CCK-8試劑在槍頭上或孔壁上的殘留所帶來的誤差?可以在加樣前用培養基稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣。

　　5、CCK8試劑盒日本同仁是什么顏色?應該是粉紅色。若顏色不一樣，有可能會影響測定。

　　6、設定參比波長的目的是什么?必須設定嗎?不一定要設定。CCK-8試劑在參比波長沒有吸光度。設定參比波長的目的是為了取出由于樣品混濁所帶來的吸收。

　　7、說明書上僅寫了96孔板的測定方法，如果使用24孔板貨12孔板，應該加多少量CCK-8試劑?一般情況下建議加入CCK-8試劑的量是培養基體積的1/10。

　　8、在CCK-8顯色過程中，如何終止反應?有一下幾種方法(96孔板)： 1、 在顯色反應后，將培養板放置4℃冰箱內。 2、 每孔加10 μl 0.1 M HCL溶液。 3、 每孔加10 μl 1%(w/v)的SDS(十二烷基硫酸鈉)溶液。注意：反應停止后，應在24小時之內測定。

　　9、必須預培養細胞嗎?不一定。如果要向保持細胞的狀態，建議預培養細胞。如果不做細胞預培養，細胞內的脫氫酶可能會不穩定。也有人不做細胞預培養，但在做標準曲線和檢測時需要統一檢測條件。

　　10、預培養后，更換培養基需要細胞計數嗎?一般情況下用胰蛋白酶處理對數增長期的細胞，用血球計數盤計數，制備成一定濃度的細胞懸液即可。如果想要精密計數細胞的話，可以預培養后取培養基用血球計數盤進行計數。

　　11、CCK8試劑盒日本同仁對于不同的細胞，靈敏度是否一樣?不一樣，懸浮細胞與貼壁細胞相比較難染色。對于貼壁細胞，一般加入CCK-8培養1-4小時吸光度已經很高，但對于懸浮細胞則可能吸光度較低，可以通過延長CCK-8的加入時間或增加細胞數量來解決。

　　12、懸浮細胞和貼壁細胞在數量上有何區別?懸浮細胞由于染色比較困那，一般需要增加細胞數量和延長培養時間。貼壁細胞染色比較容易，若細胞數量過大，有時吸光度會超過酶標儀的讀數。

　　13、應該每次做標準曲線嗎?建議每次做。雖然細胞是一樣的，但是細胞的狀態不一定一樣，對于狀態不一樣的細胞，建議每次做標準曲線。如果試劑的批號不一樣，靈敏度可能會有輕微的差異，對于不同的批號建議分別做標準曲線。

　　14、有時在藥物作用情況下，細胞已經死亡，但是脫氫酶的活性還在，是否能計算細胞數量?不能。由于CCK8試劑盒日本同仁是通過和細胞內的脫氫酶進行反應間接反映活細胞數量，如果細胞已經死亡，但脫氫酶的活性還在，則試劑測定的細胞數量將會比真實值高，不能真實反映活細胞數量，建議采用別的方法測定。

　　通過兩篇文章的介紹，相信可以解決大部分客戶對于CCK8試劑盒日本同仁的疑問!